在逐点成像中,空间分辨率约等于扫描步长或解吸/电离斑直径(取较大者)。步长 20μm 表示每 20μm 取一个像素;步长越小,图像越细,但像素总数与总时长近似按平方增长。
需注意“标称分辨率”与“有效分辨率”的差异:源光学可聚焦到某尺度,但前处理迁移、信号噪声会劣化实际可分辨细节,故有效分辨率常低于标称。
源层面:激光/离子束焦斑、喷雾斑、光化学作用区;机械层面:位移台精度与扫描步长;样品层面:前处理保真(冷冻切片、避免迁移)、导电处理(真空源)。任一环节放松都会拉低有效分辨率。
因此高分分辨率是系统工程:即便源可聚焦到亚微米,若切片迁移或扫描不稳,仍得不到亚细胞细节。
常规成像(DESI、LDPI、DPI、常压 MALDI)多在微米至数十微米;透射 MALDI 可达亚微米至微米;TOF-SIMS 借聚焦离子束进入亚微米乃至纳米级。分辨率越高,单像素信号越弱、通量越低。
选型应以科学问题倒推:组织分区用数十微米足矣,细胞异质性需单细胞级(如 2μm),细胞器定位才需亚细胞/纳米级(TOF-SIMS、t-MALDI)。
分辨率提升伴随像素数平方增长与单点信号稀释,需在分辨率、通量与信噪比间权衡;常以“低分辨快筛+高分辨定点”两级策略控制总时长。前处理保真是高分辨的前提。
对免基质常压需求,LDPI/DPI 等源可在微米级工作;对极致分辨,评估真空高分辨路径并以 imzML/专用软件做可视化。
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